采用ECT-快速轉(zhuǎn)分化試劑盒，可以在10天內(nèi)完成轉(zhuǎn)分化，感染的GFP+細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率>90%，經(jīng)過分離純化，大部分皮膚細(xì)胞株獲得神經(jīng)元的純度>95%。

Day -5
1、提前準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)化的皮膚成纖維細(xì)胞：在含有15% FBS及1X青鏈雙抗的高糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一般需要5-7天可以長滿匯合，每株細(xì)胞約需要2-3皿10 cm培養(yǎng)皿。

Day -1
1、解凍包被液(ECT-CS)：在4°C過夜解凍或室溫水浴快速解凍使用，避免多次反復(fù)凍融。
2、包被培養(yǎng)皿：把10 ml ECT-CS用DMEM稀釋到50 ml,移取5 ml/皿，共10皿，置于37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育過夜用前吸去包被液即可，不需要洗滌，但應(yīng)避免包被表面揮干。

Day 0
1、皮膚成纖維細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)與培養(yǎng):吸去培養(yǎng)液；DPBS洗滌，胰酶37°C消化4分鐘，加培養(yǎng)液中和胰酶并吹打成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后在每個(gè)包被培養(yǎng)皿中加入8x10^5個(gè)細(xì)胞，搖勻后轉(zhuǎn)入5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱。
2、慢病毒解凍：在室溫水浴中快速解凍后，酒精噴洗凍存瓶、擦拭后轉(zhuǎn)入生物安全柜中操作。
3、慢病毒感染：皮膚成纖維細(xì)胞完全貼壁(一般約3-6小時(shí))后，吸去培養(yǎng)液，立即小心加入慢病毒(7-10 ml/10 cm培養(yǎng)皿)，轉(zhuǎn)入37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱(5% CO2)繼續(xù)培養(yǎng)過夜。

Day 1
1、成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液換液：慢病毒感染18小時(shí)后，把含有殘余病毒的培養(yǎng)液吸入含有84消毒液的廢液瓶中，然后盡快加入10 ml/皿新鮮的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)入37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱(5% CO2)繼續(xù)培養(yǎng)過夜。

Day 2 and Onward
1、轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)液配制：把0.25 ml ECT-GS及10 ml ECT-NIMS加入250 ml室溫平衡的ECT-NIM中，混勻后即可使用，余下置于4°C避光保存。
2、快速轉(zhuǎn)分化：在感染后第2天，吸去皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10 ml/皿轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)液ECT-NIM，之后每2天行半換液。感染細(xì)胞表達(dá)GFP，轉(zhuǎn)化5天后在熒光顯微鏡下可觀察到胞體變小、隆圓飽滿、突起生長等形態(tài)變化，至第10-12天基本轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞，此時(shí)可進(jìn)行分離純化、繼續(xù)培養(yǎng)、鑒定分析及應(yīng)用。